Методы определения паразитов рыб

Исследование пресноводных рыб на зараженность паразитами

Исследование пресноводных рыб на зараженность описторхозом

Описторхоз рыб – болезнь карповых (язя, плотвы, лета, сазана, линя, чебака и др.), вызываемая личиночной стадией трематоды Opisthorchus felineus, именуемой еще кошачьей, или сибирской двуусткой. Болезнь распространена в Обь-Иртышском бассейне, в водоемах, впадающих в Азовское, Черное и Каспийское моря, а также в водоемах Татарии. Эндемичными по описторхозу являются также определенные районы и нашего края. Дефинитивные хозяева — человек, сосана, кошка и путные звери; первый промежуточный хозяин — моллюск бнтиния лючи, а второй — вышеназванные рыбы семейства карповых. Половозрелый паразит (сосальщик) обитает в печени, желчном пузыре и протоках поджелудочной железы дефинитивных хозяев. Яйца гельминта вместе с фекалиями попадают в воду, дальнейшее развитие до стадии церкариев проходит в моллюске. Церкарии после выхода из организма моллюска проникают в подкожные слои мышц рыб и превращаются в метацеркарии — личинки. Метацеркарии неразличимы невооруженным глазом, 0,2—0,3 мм. Это свернутая личинка в овальной или круглой цисте с толстой оболочкой.

В местностях, неблагополучных по описторхозу, рыб необходимо выборочно исследовать на наличие личинок этого паразита. Метацеркарии обнаруживают в мышечной ткани рыб, в основном — в спинной и хвостовой частях, а иногда — и в толще чешуи. Чаще всего метацеркарии поселяются в поверхностных слоях мышц на глубине до 2 мм и в подкожной клетчатке.

При компрессорном исследовании скальпелем удаляют чешую с одного бока под спинным плавником рыбы, затем надрезают кожу в двух направлениях. Первый разрез делают впереди спинного плавника перпендикулярно продольной оси тела до боковой линии, второй — от конца первого надреза по направлению к хвостовому плавнику вдоль боковой линии. Пинцетом поднимают край кожи и отпрепаровывают ее на площадки до 25 см 2 так, чтобы подкожная клетчатка осталась на поверхности мышц. После этого срезают поверхностный слой мышц толщиной 0.2—0,5 см, нарезают мелкими кусочками и размещают по всей поверхности нижнего стекла компрессора, покрывают верхним стеклом и сжимают винтами. Под малым увеличением микроскопа или под трихинелдоскопом просматривают все кусочки, взятые от одной рыбы. Личинки легко обнаруживаются.

Характерная особенность личинки описторхис — наличие внутри цисты червячка адолескария с двумя присосками и большого черного зернистого пятна (пигментированный мочевой пузырь).

При исследовании вяленой, копченой и соленой рыбы ее предварительно вымачивают.

Жизнеспособность метацеркариев определяют следующим образом. Их изолируют от ткани, помещают в каплю физиологического раствора на предметном стекле, покрывают покровным и микроскопируют вначале под малым, а затем большим увеличением микроскопа. У погибших метацеркариев нарушена целостность оболочки, содержимое в состоянии зернистого распада, экскреторный пузырь разрушен, присоски слабо выражены. Живые метацеркарии в цисте подвижны. Подвижность вызывают механическим воздействием или подогреванием личинки (не выше 400С).

Неподвижность личинки не свидетельствует о ее гибели. При исследовании, свежевыловленной рыбы, а также при комнатной температуре живые личинки бывают неподвижными. Поэтому исследуют большое количество личинок с применением тепла, а также учитывают степень выраженности присосок и экскреторного пузыря.

Санитарная оценка. При сильной степени поражения мыши живыми или мертвыми метацеркариями рыбу направляют на техническую переработку — утилизацию, при слабой степени — ее обезвреживают проваркой — не менее 30 мин, замораживанием (температура не выше —150С) в течение 14 суток, крепким посолом (концентрация рассола не ниже 14%) не менее 14 суток.

Рыбу, зараженную метацеркариями в сильней степени, после промораживания разрешается использовать на корм пушным зверям. На рынках неблагополучной по описторхозу местности вывешивают объявления о необходимости обезвреживания пресноводной рыбы с указанием режимов и сроков обработки.

Исследование пресноводных рыб на зараженность плероцеркоидом (лентец широкий)

Дифиллоботриоз рыб – инвазионная болезнь, вызываемая личиночной стадией лентеца широкого – Diphilobothrium latum, относящегося к цистодам. Дефинитивные хозяева – человек, собака, кошка; первый промежуточный хозяин – рачок циклоп, а второй—рыбы (щука, окунь, ерш, налим). Человек и домашние плотоядные животные заболевают при поедании плохо проваренной рыбы, зараженной плероцерокоидами лентеца широкого. В кишечнике дефицитных хозяев развивается ленточный гельминт — лентец широкий. Яйца лентеца попадают с фекалиями в воду, из них формируются корацидии, которых заглатывает рачок циклоп. В теле циклопа корацидии превращаются в процеркоидов, а у рыбы, проглотившей зараженного рачка, — в плероцеркоидов. Последние локализуются у разных видов рыб во внутренних органах, икре и мышцах и представляют собой молочно-белого цвета червячков длиной 1-1,5 см, шириной 2-3 мм, свободно лежащих в тканях. Головной конец плероцеркоида более широкий, с ясно выраженной присасывающей щелью, задний — узкий, закругленный.

Другие виды лентецов — это лентецы малый и узкий. Дефинитивные хозяева – человек, плотоядные животные и рыбоядные птицы; промежуточные хозяева – рачок-циклоп и рыбы семейства лососевых (сиг, омуль, хариус, ряпушка), обитающие в водоемах Сибири. Плероцеркоиды у этих рыб располагаются в полости и на серозных покровах желудочно-кишечного тракта.

Диагноз ставят при внешнем осмотре полости тела, внутренних органов и мышц. Рекомендуется также компрессорная методика исследования внутренних органов. Срезы толщиной 6—8 мм сдавливают в компрессориуме и просматривают под лупой или малым увеличением микроскопа. У щук плероцеркоидов чаше находят между икринками или на поверхности яичника. После обследования полости тела и внутренних органов приступают к исследованию мышц. Снимают кожу, разделяют мышцы на отдельные волокна и исследуют тоже компрессорным способом.

Рыбу, пораженную плероцерокоидами лентецов, обязательно проваривают не менее 30 мин или используют для приготовления консервов. Такую рыбу можно обеззараживать замораживанием при температуре минус 18 °С в течение 48 ч или при минус 12 °С не менее 6 сут, а также крепким или средним посолом в течение 14 сут (при крепком посоле содержание соли в мясе рыбы выше 14%, при среднем — 10-14%). Сильно пораженную плероцеркоидом лентеца широкого рыбу направляют на техническую утилизацию.

Рыба, выловленная из водоемов, неблагополучных по дифиллоботриозу, относится к условно годной и допускается к использованию только после обезвреживания.

В районах, неблагополучных по дифиллоботриозу, в местах торговли рыбой должны быть вывешены объявления о покупке ее после ветеринарно-санитарного осмотра и необходимости тщательной проварки щук, окуней, налимов, ершей и рыб семейства лососевых.

Исследование рыбы на предмет поражения метагонимозом

Метагонимоз – болезнь карповых и лососевых рыб, вызываемая личиночной стадией (метацеркариями) дигенетического сосальщика Metagonimus Jokogawai. Регистрируют у рыб, обитающих в реках Днепр, Дунай, Днестр, Амур. Дефинитивные хозяева – человек, собака, кошка, пушные звери и рыбоядные птицы (чайка, цапля); промежуточные хозяева: первый — моллюск мелания, второй — рыбы семейства карповых и лососевых. Половозрелый гельминт у дефинитивных хозяев локализуется – в тонком отделе кишечника. Яйца паразита попадают в воду, и дальнейший биологический цикл проходит так же, как у трематоды Opisthorchus felineus. Метацеркарии метагонимуса поражают жабры, плавники и чешую. Размеры личинок 0,18-0,21 мм, их диагностируют микрокопированием. Для этого кусочек плавников, жабр или чешуйки помешают между предметными стеклами и просматривают при малом увеличении микроскопа. Для улучшения видимости с нижней стороны чешуек удаляют пленку и препараты просветляют 50%-ным раствором глицерина. Метацеркарии метагонимуса овальной или круглой формы, внутри цисты расположена личинка слегка подковообразной формы.

Проводят санитарную обработку рыбы: удаляют жабры, плавники и чешую. Удаленные части проваривают и уничтожают или используют для технических целей (для приготовления клея). Тушки рыб после санитарной обработки обеззараживают проваркой в течение 30 мин или замораживают до минус 18-20 0С и выдерживают 8-10 сут. Потребители должны быть поставлены в известность о необходимости обеззараживания рыбы перед употреблением в пищу.

Исследование рыб на предмет исследования паразитов, непатогенных для человека

Триенофороз — повсеместно распространенная болезнь пресноводных рыб, вызываемая ленточными червями двух видов Triaenophorus nobulosus и Тr. сrassus. Дефинитивный хозяин – щука; первый промежуточный хозяин – рачок, второй – многие виды нехищной рыбы (налим, окунь, судах, форель, корюшка, снеток). Половозрелые паразиты паразитирют в кишечнике у щуки. Яйца триенофорус нодулозус попадают в воду, превращаются в корацидиев и заглатываются рачками, в теле которых корацидий превращается в процеркоида. Зараженных рачков проглатывают нехищные рыбы. В их организме процеркоиды из кишечника проникают в брюшную полость, а затем внедряются в печень и мускулатуру, реже в другие органы, где и развиваются личинки — плероцеркоиды. Личинки бывают окружены соединительнотканной капсулой.

У Т. сrassus биологический цикл такой же, но вторым промежуточным хозяином чаще служат рыбы семейства лососевых, преимущественно сиги, у которых личинки триенофоруса локализуются в мышцах. Личинки также окружены соединительнотканной капсулой и более крупных, размеров (до горошины). Плероцеркоиды триенофоруса необходимо дифференцировать от плероцеркоидов лентецов, которых они напоминают по величине и форме. Для этого личинку помешают между предметными стеклами, раздавливают и исследуют под малым увеличением микроскопа. Головной конец личинки триенофоруса вооружен двумя фиксирующими приспособлениями, каждый из которых имеет четыре крючка и напоминает силуэт летящей птицы. У личинок лентецов имеется присасывающая щель, крючки отсутствуют.

Щук, зараженных половозрелой формой паразита, и рыб, у которых плероцеркоид локализуется в печени, выпускают в потрошенном виде. Рыб с пораженной мускулатурой при слабом инфицировании проваривают или перерабатывают на консервы, — а при сильном — после термической обработки скармливают животным.

Лигулез. Довольно распространенная болезнь пресноводных рыб. вызываемая личинками ленточного червя Ligula interstinalis. Дефинитивные хозяева — чайки-каравайки и дикие утки, промежуточные хозяева — рачок и рыба семейства карповых. Яйца ленточного гельминта, паразитирующего у птиц, попадают в воду и превращаются в корацидиев. Последних -заглатывают рачки, в теле которых они развиваются в процеркоидов. В брюшной полости рыб (лет, плотва, густера. уклея, карась, карп и др.), проглотивших рачков, зараженных процеркоидами. Формируется личинка — плероцеркоид. Личинки, находясь в брюшной полости рыбы длительное -время до 2-3 лет, достигают длины от 10 см до 1 м. В связи с этим у больных рыб сильно, вздувается брюшко, иногда кожа в области брюшка лопается, личинки (лигулы) попадают а воду, а рыба погибает.

При хорошей и удовлетворительной упитанности и отсутствии гидремии мышечной ткани рыбу выпускают в потрошенном виде, истощенную рыбу бракуют и используют на кормовые цели.

Диплостоматоз (паразитическая катаракта глаз). Болезнь, вызываемая метацеркариемем сосальщика Diplostomum spathaceum и регистрируемая среди различных семейств рыб пресноводных водоемов. Дефинитивный хозяин — чайка, первый промежуточный хозяин — моллюск прудовик, второй — рыбы преимущественно семейства карповых, реже окуневых (окунь, ерш). Половозрелый сосальщик паразитирует в кишечнике чаек. Яйца паразита, попавшие в воду, проглатывают моллюски. Из моллюска в воду выходят церкарии, которые нападают на рыб. В теле рыбы личинки (метацеркарии) паразитируют в хрусталике глаза. У больных рыб развивается пучеглазие, иногда выпадает хрусталик, в результате чего рыба слепнет. Диагноз уточняют микроскопическим исследованием. Извлекают глаза рыбы и отделяют стекловидное тело и хрусталик.

Их помешают на предметное стекле, добавляют каплю дистиллированной воды, прикрывают другим другим стеклом и исследуют при малом увеличении микроскопа. Личинка овальной формы, размер ее 0,4 мм.

Рыбу при удовлетворительной упитанности выпускают без ограничения, истощенную рыбу используют на кормовые цели.

Постодиплостоматоз (неаскоз, черно-пятнистая болезнь). Болезнь рыб водоемов южных районов (дельта Волги, Днепра, Аральское море, Кубанские лиманы и др.), вызываемая метацеркарием сосальщика Posthodiplostomum cuticola. Дефинитивный хозяин — рыбоядные птицы, главным образом цапли. Первый промежуточный хозяин — моллюск Planobris planobris, второй — рыбы семейства карповых. Половозрелый сосальщик паразитирует в кишечнике птиц. Яйца гельминта попадают в воду и проглатываются моллюсками. Из тела моллюсков выходят церкарии, которые проникают в эпителиальные и субэпителиальные ткани поверхностных покровов рыб и локализуются в них, превращаясь в метацеркариев, окруженных соединительнотканной капсулой (цистами). На коже рыб около цист образуются черные пятнистые бугорки. Предполагают, что черный пигмент — это продукт разрушения гемоглобина. На теле рыб таких пятен может быть до нескольких сотен. Личинки размером 0,2-0.3 мм имеют две части: верхнюю — листочковидную и нижнюю – вытянутую. Под верхней частью расположено темное пятно — моченой пузырь. Микроскопическим исследованием паразита можно обнаружить только в самой ранней стадии болезни. При вскрытии черных пятен паразита не выявляют, он рассасывается внутри капсулы.

Рыбу при истощении или деформации тела выбраковывают. При отсутствии таких изменений ее направляют на предприятия общественного питания, где после удаления кожного покрова с чешуей проводят кулинарную обработку. Допускается использовать рыбу для производства консервов и не рекомендуется солить, коптить, мариновать и вялить.

Миксо- и микроспоридиозы. Выявляют у рыб по наличию цист. Цисты миксоболюсов (чаще Myxobolus mulleri) локализуются у пресноводных рыб к жабрах, коже, печени, почках, икре. Цисты микроболюсов (Glugea hertwigi) встречаются у корюшки и снетка, они поражают полости тела и внутренние органы рыб, хорошо заметны при внешнем осмотре, так как просвечивают через ткань тела. Для человека эти паразиты неопасны.

При сильном поражении цистами (когда их количество превышает 20) или истощении рыбу утилизируют. При слабом поражении проводят зачистку и после потрошения направляют в кулинарную обработку или используют для приготовления консервов.

Поражение рыб пиявками. На поверхности тела рыб могут паразитировать пиявки Piscioia geometra длиной 2-6 см, зеленовато-серого цвета. Пиявки прикрепляются к рыбам и высасывают кровь, вследствие чего на коже рыб образуются ранки.

Пиявок удаляют, а рыбу выпускают без ограничения.

Поражение рыб ракообразными. Рачки рода аргулюс (карпоеды) поражают поверхностные покровы рыб, вызывают кровоизлияния и изъязвления. Тело рачков покрыто хитиновым головогрудным щитком, размер паразита 5-6 мм.

Рачок эргазилюс паразитирует в жабрах, размером 2-4 мм. При сильном поражении жабры покрыты слизью, грязно-серого цвета.

Рачок лорнеа ципринаус поражает карповых рыб. Он поселяется в коже, размер его 9-22 мм.

Рачок лорнеа бранхиалис паразитирует в жабрах рыб семейства тресковых и камбаловых, размер его 3-4 мм.

Рачок циматоа пунктата — крупный паразит, размером до 1 см, локализуется в жабрах.

Рачков счищают с поверхности тела рыб плотными щетками, после чего рыбу выпускают без ограничения. Пораженные жабры следует удалить. При истощении и многих глубоких поражениях мышц рыбу направляют на кормовые цели.

Нематодозы. Болезни рыб, вызываемые круглыми червями. Паразиты или их личинки локализуются в кишечнике, печени, полости тела или даже под кожей. Все виды нематод, регистрируемые у рыб, не патогенны для человека.

Рыба, слабо пораженная круглыми червями, пригодна для использования на пищевые цели. При поражении кишечника, печени или обнаружении нематод в полости рыбу выпускают после потрошения. В случаях сильного поражения нематодами, когда мясо приобретает неприятный запах или имеет признаки водянки, рыбу направляют на кормовые цели или утилизируют.

Исследование рыбы, пораженной личинками жука-кожееда. Этот жук поражает только консервированную рыбу и особенно сушеную и вяленую. Самка откладывает яйца чаще всего в жабры. Через четверо суток из яйца выходит личинка — шашел, которая и является вредителем рыбы. Шашел изнутри точит мягкие ткани рыбы, питаясь ими и превращая их в труху. Кроме того своими экскрементами он загрязняет рыбу и придает ей неприятный запах.

Санитарная оценка. При сильном поражении рыбы личинками жука кожееда, а также при неудовлетворительных органолептических показателях ее бракуют. При слабом поражении (шашел находится только в жаберной полости) рыбу выпускают без ограничений.

Исследование рыбы, пораженной личинками сырной мухи. Сырная муха откладывает яйца в жабры, ротовую полость рыб, плавники и даже в тару. Из яйца выходит личинка, которая претерпевает несколько стадий своего развития. В последней (третьей) стадии личинка очень подвижна, делает прыжки любую сторону. Она довольно быстро съедает мышечную ткань и от рыбы остаются скелет и кожа. Спустя 15—22 сутки личинка превращается во взрослую муху.

Санитарная оценка. При слабом поражении, когда личинка находиться на поверхности рыбы, ее очищают и выпускают без ограничений. При сильном поражении, что определяют по наличию в мышцах извилистых ходов личинок, рыбу бракуют и отправляют на техническую утилизацию.

Паразитологическое исследование

Для паразитологического исследования используют живых или только что уснувших рыб всех возрастных категорий. Берут следующее количество рыб: мальков — 25 экз., сеголетков-15-25 экз., годовиков-10-15 экз., остальных возрастных групп по 3-5 экз.

Исследование проводят в следующем порядке: кожа, плавники, ротовая полость, жабры, глаза, кровь, сердце, брюшная полость (печень, селезенка, плавательный пузырь, мочевой пузырь, желчный пузырь, почки, половые железы, кишечник), мышцы, головной и спинной мозг.

Результаты исследований вносят в рабочий журнал, где указывают дату, место вылова рыбы, пол, возраст, массу и длину рыбы, данные паразитологического исследования с предварительным и окончательным определением паразитов.

Для обнаружения трипанозом и криптобий у рыбы берут кровь из сердца и делают мазки.

Для предотвращения свертывания крови добавляют 1 %-ный раствор лимоннокислого натрия, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Чтобы мазок не высыхал, края покровного стекла смазывают вазелином. Одновременно несколько мазков крови высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Романовскому — Гимзе или гематоксилином и микроскопируют.

Кожный покров. При наружном осмотре кожного покрова и плавников собирают всех паразитов, видимых простым глазом: паразитических ракообразных, пиявок, нематод и других (их предварительно определяют и фиксируют для последующего изучения). Затем скальпелем снимают слизь со всей поверхности тела (мальки, сеголетки, годовики) или с нескольких участков (крупные рыбы) и с плавников, микроскопируют, помещают ее на предметное стекло и смешивают с 2-3 каплями прокипяченной и остуженной воды. Накрывают покровным стеклом и просматривают сначала под лупой, а затем под малым увеличением микроскопа. Возбудителя костиоза можно обнаружить только при среднем увеличении микроскопа. Кроме возбудителей костиоза, на коже рыб паразитируют другие жгутиконосцы, инфузории, моногенетические сосальщики и др. Обнаруживают также споровиков, локализирующихся в дермальных бугорках. Под кожей, в подчешуйных кармашках и в лучах хвостового и спинного плавников иногда находят нематод.

Крупных паразитов (рачков, гельминтов) подсчитывают в абсолютных числах, а мелких (споровиков, инфузорий и других простейших) — в относительных, то есть учитывают число паразитов в десяти полях зрения микроскопа и определяют средние показатели. При этом высчитывают экстенсивность и интенсивность заражения каждым паразитом в отдельности для рыб каждого вида и возраста.

При осмотре кожного покрова можно видеть пигментированные пятна (черного цвета). В этих местах в толще кожи локализуются метацеркарии Posthodiplostomum cuticula. На плавниках встречаются цисты сосальщика Bucephalus.

После кожного покрова обследуют жаберный аппарат. Жаберные дужки помещают на предметное стекло, всех паразитов, видимых простым глазом, подсчитывают и фиксируют. С жаберных лепестков делают соскоб или берут жаберные дужки и с несколькими каплями воды зажимают между двумя предметными стеклами до прозрачности и исследуют под малым увеличением микроскопа.

Споровики, некоторые инфузории и личинки сосальщиков могут быть и в соединительных образованиях (бугорках); обнаружить и извлечь их можно только после разрыва стенки бугорка с помощью препаровальной иглы. В кровеносных сосудах жабр встречаются яйца сангвиникол, споры и мицелий гриба.

Глаза. Для обнаружения паразитов (личинок сосальщиков) глаза извлекают из глазных впадин, кладут на предметное стекло и вскрывают острыми ножницами с внутренней стороны. Стекловидное тело, хрусталик и содержимое передней камеры глаза помещают между двумя предметными стеклами и просматривают под малым увеличением микроскопа.

Брюшная полость. Вскрывают брюшную полость по методике, описанной в разделе «Бактериологическое исследование», с той только разницей, что при паразитологическом исследовании нет необходимости соблюдать условия стерильности. Дугообразный разрез к основанию левого грудного плавника ведут от анального отверстия, вводят непосредственно в него тупой конец одной из бранш ножниц. Вскрытую брюшную полость осматривают, крупных паразитов (лигуна и др.) извлекают, а имеющиеся на серозных покровах и брыжейке бугорки микроскопируют.

Сердце вынимают вместе с крупными сосудами, помещают бактериологическую чашку с физилогическим раствором, вскрывают его полости, промывают образовавшийся осадок и микроскопируют на наличие возбудителя сангвиниколеза и некоторых метацеркариев.

Печень. При наружном осмотре печени можно обнаружить на ее поверхности личинок круглых червей и белые бугорки с заключенными в них личинками ленточных червей. Чтобы обнаружить паразитов, обитающих внутри печени, ее делят на небольшие кусочки, компрессируют и исследуют под лупой, а затем под малым увеличением микроскопа. Желчный пузырь вырезают, помещают на предметное стекло, разрезают ножницами, делают соскоб с внутренней оболочки стенки пузыря. Соскоб и сам желчный пузырь помещают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой или микроскоп. В желчном пузыре можно обнаружить простейших сосальщиков и личинок ленточных червей.

Селезенку исследуют так же, как печень.

Почки. Для обнаружения паразитов кусочки органа помещают между стеклами и исследуют под микроскопом. В почках можно найти крупных паразитов, споровики, яйца сосальщиков, занесенных током крови.

Плавательный пузырь. Наружную волокнистую оболочку плавательного пузыря снимают. Паразиты, находящиеся в его стенке и полостях. Обычно хорошо видны. Их извлекают и исследуют. Иногда берут соскоб с внутренней оболочки пузыря больной рыбы и тщательно микроскопируют.

Мочевой пузырь. Методика исследования сходна с исследованием желчного пузыря. В мочевом пузыре обнаруживают сосальщиков, споровиков и инфузорий.

Половые железы. Для обнаружения паразитов железу частями компрессируют между двумя стеклами и просматривают под микроскопом. В половых железах встречаются микроспородии и крупные плероцеркоиды, окруженные фиброматозными сумками.

Желудочно — кишечный тракт. Пищевод, желудок и кишечник извлекают, освобождают от жира, расправляют и вскрывают, начиная с пищевода. Обнаруженных крупных паразитов (ленточных и круглых червей, сосальщиков) помещают в физиологический раствор. Содержимое из разных отделов желудочно — кишечного тракта исследуют компрессорным методом под микроскопом. Затем с помощью скальпеля делают глубокий соскоб со слизистой оболочки из нескольких мест и исследуют на наличие микроскопических паразитов.

Мысшцы. Для обнаружения зараженности рыб плероцеркоидами, лентецами и другими крупными паразитами мысшцы разрезают на пластинки толщиной 5 мм и просматривают. Чтобы найти мелких паразитов, берут небольшие кусочки мышц из различных частей тела и исследуют компрессорным методом под лупой и под малым увеличением микроскопа.

Головной и спинной мозг исследуют компрессорным методом. В этих органах можно обнаружить споровиков Myxosoma cerebralis Tetrocotyle variegateu.

Хрящи. Для обнаружения возбуителя миксозомоза (вертежа лососевых) компрессорным методом исследуют черепные и межпозвоночные хрящи.

Мазки крови окрашивают азур-эозином по Романовскому — Гимзе. Готовую краску Романовского перед окрашиванием разводят нейтральной дистиллированной водой из расчета 2 — 3 капли краски на 1 мл воды.

Растворметиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки 30 с, затем промывают водой и дифференцируют в течении нескольких секунд 5 — 10%-ным раствором танина. Эритроциты окрашивают в красновато-фиолетовый цвет, плазма простейших кровепаразитов — в ярко-голубой, ядра лейкоцитов — в фиолетовый.

Для изучения морфологии паразитических инфузорий их окрашивают железным гематоксилином по Гейденгайну, а также гематоксицилином Делафильда или квасцовыми кармином.

Паразитических жгутинконосцев окрашивают железным гематоксилином или по Романовскому — Гимзе.

Слизистых споров окрашивают 1%-ным водным раствором метиленового синего 30 — 60 мин, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96%-ный и абсолютный) и просветляют ксилолом.

Трематод и цестод окрашивают квасцовым кармином. Фиксированные в спирте препараты промывают в течении нескольких часов в проточной или часто сменяемой воде и помещают в краску от одной минуты до нескольких часов (в зависимости от толщины гельминта). Продолжительность окраски можно контролировать микроскопией препаратов. Окрашенные препараты переносят в дистиллированную воду, где в течении нескольких минут их тщательно отмывают от краски. Отмытых паразитов осторожно сушат фильтрованной бумагой и проводят через спирты возврастающей крепости (70, 80, 96%-ным), выдерживая в них несколько часов. Обезвоженных паразитов просветляют маслом и ксилолом.

Мелких цестод мождно окрашивать молочнокислым кармином по Блажину. Молочную кислоту разводят в 2 раза дистиллированной водой, добавляют небольшое количество кармина (в зависимости от желаемой степени окраски). Жидкость кипятят. Красить лучше свежие, нефиксированные объекты. Продолжительность окраски контролируют под микроскопом, а в случае перекрашивания объект переносят в цельную молочную кислоту для обесцвечивания. Окрашенный препарат промывают 20-60 мин водопроводной водой и помещают в бальзам.

При окраске крупных цестод этот способ модифицировали. Цестод промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде при комнатной температуре летом один день, в холодное время года — 3-4 дня. Затем их помещают на 4-6 ч в краску (0,3 г кармина на 100 мл 30 %-ной молочной кислоты). Интенсивность прокрашивания контролируют под микроскопом. После этого на сутки их переносят в дистиллированную воду, в которую добавляют 3 капли раствора сернокислого железа и 2 капли 1%-ного раствора фенола. Далее цестод переносят на чистое предметное стекло, расправляют и высушивают при температуре 30-37°. Высохший очень плотно приставший к стеклу препарат заливают канадским бальзамом или канифолью, растворенной в смеси, состоящей из равных частей хлороформа и абсолютного спирта.

Для приготовления временных препаратов нематод не окрашивают, а кладут для просветления в неразведенную молочную кислоту или лактофенольный раствор (2 части глицерина, 1 часть молочной кислоты, 1 часть фенола и 1 часть воды) на 3-10 дней. Мелких гельминтов на 1-2 дня помещают в молочную кислоту (1-2 капли) и накрывают покровным стеклом.

Постоянные препараты для микроскопического исследования нематод готовят так. Фиксированных в 70 %-ном спирте живых гельминтов через сутки помещают на несколько часов (в зависимости от величины нематод) в 96 %-ный, а затем в абсолютный спирт на 3-5 мин. После этого их переносят в гвоздичное или хеноподиевое масло или карбоксилол на 2-5 мин, а затем кладут на чистое предметное стекло и заливают бальзамом.

Скребней (акантоцефалов) для изучения хоботка и крючков просветляют. Для этого их из 70 %-ного спирта переносят сначала в 50 %-ный глицерин, а затем в чистый. Структуру других органов изучают после полного обезвоживания гельминтов путем постепенного проведения их через спирты возрастающей крепости. Из абсолютного спирта гельминтов переносят на предметное стекло в каплю кедрового масла, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Паразитических рачков исследуют в той же жидкости, в которой хранят. Красить их не обязательно. Иногда прибегают к окраске борным кармином, эозином, сафранином и др.

Идентификацию паразитов проводят по «Определителю паразитов пресноводных рыб СССР» (Изд-во АН СССР, 1984-1985 гг., т. 1-3).


Таблица I. Колонии бактерий, положительно реагируют на цитохромоксидазу (окрашены в сине — голубой цвет) (А); Б — определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом бумажных дисков на агаре


Таблица II. Кровь карпа в норме: 1 — гемоцитобласт; 2 — миелобласт; 3- промислоцит; 4 — нейтрофильный миелоцит: 5 — нейтрофильный, 6, 7 — базофильные и 8 — псевдозоэозинофильный метамиелоциты; 9, 10 — налочкоядерный и сегментноядерный нейтрофилы; 11 — моноцит; 12 — 15 — лимфоциты; 16 — 21 — эритроциты


Таблица III. Вирусная геморрагическая септицемия форели (по Гиттино): 1 — анемия и кровоизлияния в жабрах; 2 — геморрагии в мышцах и висцеральной жировой ткани; 3 — множественные геморрагии в мускулатуре, плавательном пузыре


Таблица IV. Аэромоноз (краснуха) карпов: 1,2- асцитная форма; 3 — язвенная форма


Таблица V. Гиродактилез и дактилогироз рыб (А): 1 — паразиты на жабрах; 2 — гидродактилюс; 3 — дактилогирус; Б — возбудители протозоиных болезней рыб: 1 — триходина; 2 — хилодонелла; 3 — ихтиофтириус


Таблица VI. Возбудители гельминтозов рыб: 1 — ботриоцефалюс: 2 — кавиа: 3 карп со зрелыми филометроидесами


Таблица VII. Возбудители крустацеозов рыб: 1 — аргулюс: 2 — лернеа; 3 — пораженная рыба


Таблица VIII. Воспаление плавательного пузыря карпов (1); 2 — пузырь при остром и 3 — хроническом течении болезни

Предупреждение массовой гибели рыб и правильная организация лечебных мероприятий возможны только после установления причины болезней, т. е. после постановки диагноза.

Диагноз на заболевание рыб ставят на основании эпизоотологического, клинического, патологоанатомического, паразитологического, а в случае необходимости микробиологического или токсикологического исследования, которые проводят в специализированных лабораториях научно-исследовательских институтов или ветеринарно-санитарных станций.

Эпизоотологическим исследованием называется сбор и анализ данных о начале и характере течения заболевания, видовом составе и численности (плотности посадки) рыб; размерах и характере водоема, особенностях его водоснабжения: солевом, газовом и термическом режиме; характере зарастаемости водоема надводной жесткой и подводной мягкой растительностью; характеристике естественной кормовой базы (данные о количестве и видовом составе планктона и бентоса), составе и качестве комбинированных кормов при искусственном кормлении; способах, сроках и количестве внесения удобрений, а также выявление источника заражения и т. п.

Эпизоотологическое исследование проводят путем опроса ихтиологов или рыбоводов и по ветеринарной отчетности о состоянии обследуемого водоема (или хозяйства) за предыдущие годы.

Клиническим исследованием называется внешний осмотр живой или недавно уснувшей рыбы и описание признаков заболевания. Клиническому осмотру подвергают по возможности не менее 100 рыб каждого вида, обитающего в обследуемом водоеме. При этом отмечают также отклонения в поведении рыб, характере дыхания, реакции на внешние раздражения. При внешнем осмотре обращают внимание на форму тела, окраску, количество слизи, наличие каких-либо повреждений, уродств, язв, опухолей и т. д., а также паразитов, видимых невооруженным глазом.

Клиническое исследование помогает определить направление дальнейших лабораторных исследований.

Патологоанатомическим исследованием называется вскрытие и внешний осмотр внутренних органов, а также срезов этих органов у живой или недавно уснувшей рыбы и описание патологических признаков. Количество рыб, взятых для этой цели, зависит от возраста и колеблется от 5—10 (производители и ремонт) до 15—25 (рыбы младших возрастных групп) экз.

Вскрытие рыбы проводят осторожно, чтобы не повредить внутренних органов. При этом исследуют состояние скелетной мускулатуры, брюшной полости и внутренних органов. Обращают внимание на наличие в брюшной полости газов, жидкости различного происхождения, спаек, опухолей; изменение окраски и размеров различных внутренних органов, а также наличие цист паразитов или личинок гельминтов. Внутренние органы извлекают из брюшной полости, осторожно отделяют друг от друга и осматривают в следующем порядке: печень, желчный пузырь, селезенка, желудочно-кишечный тракт, половые железы, плавательный пузырь, почки, мочевой пузырь, сердце. Кроме того, извлекают глаза и вскрывают черепную коробку для осмотра головного мозга. Пораженные органы (или кусочки) помещают в банки с фиксатором (70°-ный этиловый спирт или 4%-ный формалин), сопровождая этикеткой с указанием вида и возраста рыбы, названием органа, указанием времени и места вылова рыбы.

В некоторых случаях при патологоанатомическом исследовании берут материал для гистологического исследования.

Гистологическим исследованием называется выявление специфических изменений или микроорганизмов на специально окрашенных и обработанных срезах органов и тканей больной рыбы. Эти исследования представляют собой серию последовательных операций, связанных с фиксацией анализируемого материала, заливкой его в различные среды (приготовление блоков), приготовлением срезов из блоков на микротоме (специальный прибор с острым ножом), окрашиванием по специальной методике срезов, наклеенных на предметное стекло. Гистологические исследования применяют для подтверждения диагноза в сомнительных случаях (цероидная дегенерация печени, миксоспоридиоз и др.), при смешанных заболеваниях, а также для выявления возбудителей, которые трудно обнаружить при обычной микроскопии (вертеж форели, кокцидиоз и др.).

Для гистологических исследований мелких рыб (мальков) после вскрытия брюшной полости фиксируют целиком, а от крупных рыб берут органы или кусочки органов размером 2ХЗХ1 см. Фиксацию материала производят в широкогорлых стеклянных банках в 10%-ном формалине или в 70—96°-ном спирте, снабжая его соответствующей этикеткой.

Паразитологическим исследованием называется просмотр давленых препаратов (или соскобов), различных органов свежей рыбы, а также сбор и определение паразитов. Для правильной постановки диагноза применяют полное паразитологическое вскрытие рыбы по методике, разработанной К. И. Скрябиным (1923) и модифицированной применительно к рыбам В. А. Догелем, Э. М. Ляйманом и А. П. Маркевичем. Количество исследуемых рыб колеблется от 10 до 25 экз. в зависимости от возраста. Рыбу для исследования следует вылавливать из разных участков водоема.

Полное паразитологическое исследование проводят в определенном порядке и начинают с внешнего осмотра рыбы. При этом собирают и фиксируют для последующего изучения всех паразитов, видимых невооруженным глазом (нематод, пиявок, рачков). Далее исследуют под микроскопом мазки из соскобов слизи, снятой с поверхности тела и плавников. После взвешивания и измерения рыбы берут кровь из сердца или хвостовой артерии, делают мазок на предметном стекле, который позднее окрашивают и просматривают под микроскопом для обнаружения кровепаразитов.

Позднее вырезают и исследуют жабры, извлекают и просматривают слизь из носовых полостей. Брюшную полость вскрывают, как при патологоанатомическом исследовании. Методика исследования печени, селезенки, почек одинакова. Вначале эти органы осматривают невооруженным глазом и собирают крупных паразитов, капсулы с личинками, цисты с миксоспоридиями. Для обнаружения более мелких паразитов весь орган или небольшой кусочек давят между стеклами и просматривают под микроскопом. При исследовании желчного и мочевого пузырей особенно тщательно рассматривают их содержимое. У плавательного пузыря исследуют стенки. Яичники и семенники сдавливают между двумя предметными стеклами и просматривают при малом и большом увеличении микроскопа.

Желудочно-кишечный тракт извлекают целиком, расправляют и вскрывают ножницами, начиная с пищевода. Крупных паразитов (гельминтов) извлекают, отмывают в физиологическом растворе или воде, а затем фиксируют. Из различных отделов кишечника делают соскоб со слизистой оболочки и исследуют под микроскопом.

При исследовании глаз их извлекают целиком из глазниц, вскрывают и просматривают хрусталик и стекловидное тело, раздавив их между предметными стеклами. Головной мозг извлекают целиком после вскрытия черепной коробки. Часть его просматривают под микроскопом, а остальную часть — компрессионным способом (раздавив между предметными стеклами) под лупой. Спинной мозг предварительно извлекают из позвоночника и просматривают, как головной. Перед просмотром мускулатуры сначала снимают и исследуют внутреннюю- поверхность кожи, а затем вырезают тонкие пластинки мускулатуры и просматривают компрессионным способом под лупой, а измельченные кусочки — под микроскопом.

При подозрении на вертеж для обнаружения спор возбудителя заболевания у форели исследуют хрящевые ткани, для чего измельчают голову и образовавшуюся массу, обильно смоченную водой, небольшими порциями просматривают под микроскопом при большом увеличении.

Материал, собранный при паразитологическом исследовании, фиксируют различными способами и обязательно снабжают этикеткой. Способы фиксации паразитов различных групп и приготовления из них микропрепаратов указаны в специальных практических руководствах.

Микробиологическими исследованиями называются работы по изучению микроорганизмов — вирусов, бактерий, грибов — возбудителей инфекционных заболеваний. Их проводят лишь при явном подозрении на инфекционное заболевание после проведения эпизоотологического, клинического, патологоанатомического, паразитологического и токсикологического исследований. Микробиологические исследования состоят из ряда работ, направленных на выделение от рыб возбудителя инфекции, культивирование (выращивание) его в условиях лаборатории на специальных питательных средах, изучение различных морфологических, биохимических, патогенных и других свойств выделенного возбудителя и определение его родовой и видовой принадлежности.

Для проведения вирусологических, бактериологических или микологических исследований больных или подозрительных по заболеванию рыб доставляют в ветеринарную лабораторию живыми. Для исследования 10—15 рыб с явно выраженными клиническими признаками перевозят в молочных бидонах, ваннах или других емкостях, заполненных водой из неблагополучного водоема.

В случае невозможности перевозки живой рыбы кусочки органов и тканей больной рыбы помещают в стерильную стеклянную посуду с 40%-ным водным раствором глицерина, заливают пробку парафином и доставляют в лабораторию.

Токсикологическими исследованиями называются химико-аналитические работы для установления вида и количества ядовитого вещества в гидробионтах, воде и почве. Токсикологические исследования проводят при явном подозрении на отравление рыб ядами. Предварительно собирают и анализируют эпизоотологические, клинические, патологоанатомические и паразитологические данные.

Для токсикологических исследований в ветеринарную лабораторию доставляют живую или недавно уснувшую рыбу (не менее 5 экз.), пробы воды, взятые в зоне гибели рыб и в благополучном участке (в каждой пробе не менее 1 л), пробы грунта из разных зон водоема, высушенные и растертые (каждая проба не менее 1 кг), пробы бентоса, фиксированные в 70°-ном спирте (не менее 100—150 г живой массы), пробы фито- и зоопланктона, фиксированные аналогично бентосу. Весь собранный материал упаковывают в соответствующую тару, опечатывают, снабжая этикетками, и высылают в соответствующее учреждение, одновременно с актом обследования водоема и сопроводительным письмом.

После всесторонних диагностических исследований устанавливают причину болезни и организуют соответствующие противоэпизоотические мероприятия.

Источники: http://biofile.ru/bio/34726.html, http://ribovodstvo.com/books/item/f00/s00/z0000003/st012.shtml, http://www.activestudy.info/metody-diagnostiki-boleznej-ryb/

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *